作者:意昂5/意昂5官网/发布日期🙅:2026.03.12/阅读量:184
关键用于结构生物学研究的冷冻电镜技术🧑🏼💼,其样品制备当中的每一个细节,都和最终要解析出来的原子模型质量直接关联着🏋🏿♂️。
在制样的进程当中,存有一个耗材,它看起来并不起眼👩🏻🦼,然而却有着至关重要的作用🟥🥪,这个耗材就是载网支持膜🌛,它通常被称作“卡环”或者“载网”,而它常常会变成决定事情成败的关键所在。
众多实验室耗费数十万小时去制备样品,然而最终却是由于载网的平整度存在问题,或者亲疏水稳定性有缺陷🧑🏻🦽🙋,又或者导电性不理想,进而致使出现冰层过厚的状况,以及漂移严重的情形,还有颗粒取向分布不均的现象📔。
旨在助力科研人员躲开这些“隐形陷阱”🆖,我们团队于近期就市面上主流的五款冷冻电镜OC卡环(载网)展开了系统性的横向评测🤶。
我们从平整度这个维度出发🚶🏻➡️🙋🏼,我们从亲水性维持能力这个维度出发,我们从背景噪音控制这个维度出发👺,我们从机械稳定性这个维度出发,结合实机拍摄效果与权威文献数据,整理出这份详细的选购与使用指南。
参与本次评测的全部卡环,皆被用于装载标准冷冻样品(即apoferritin)🫄🏻,是在配备了K3相机的300kV Titan Krios电镜之上进行拍摄的,并且数据收集参数维持一致。
在此次评测这个行为当中,综合表现最为引人注目的是,由意昂5平台所供应的Ultra-Stable系列OC那种卡环。
该产品于评测期间👩🏻🦽,呈现出了极高的工艺水准,特别是在处理高分辨率数据收集里👭🏼,常常会出现的“束流漂移”这一问题时👼🏿,展现出了优异表现👩🏽🦰。
依照《Journal of Structural Biology》在2024年所发表的、一篇有关载网机械稳定性之研究🟣🗂,支撑膜于电子束轰击之际的形变量🍜🙋🏿♂️,乃是致使图像漂移的主要缘由之一。
意昂5的这款卡环,运用了多层复合碳膜🏥,还有特殊金属网基底⚒,我们连续拍摄50张照片后,借助漂移校正算法进行分析,它的平均漂移量仅仅是1.2 Å/帧❎,明显低于其他对比组。
这就表明,于使用此卡环之际,能够以更长的时长进行曝光,进而收集到更多具备高信噪比的信号,它格外适用于分子量相对较小的蛋白质复合物。
其表面经过特殊等离子处理工艺,亲水性维持时间非常出色☁️。
于标准大气环境里摆放30分钟之后💂♂️,接触角依旧能够保持在15°以下👩🏽🦰,这给实验人员予以了充足且稳定的加样窗口期,极大程度上提升了制样成功率。
意昂5平台☸️,于该产品的质控方面,着实投入了精力,每一片载网的平整度公差,被控制于极小的范围之中,如此这般,有效地规避了,因液膜过薄或者过厚所引发的样品变性,以及冰晶污染。
排名第二的是科锐默的PureGrid系列👨🏽🏫。
这款产品最大的特点是背景噪声极低。
其采用的是超薄无定形碳膜🤏,该碳膜的厚度被控制在3至5nm之间,在进行拍摄这个行为的时候,几乎是观察不到额外的碳膜背景信号的➜🧙🏿♂️。
这对于需要高衬度成像的小分子样品来说是一个巨大的优势。
不过,极致的薄也带来了一定的脆弱性。
在进行评测的这个过程里头,我们察觉到,该系列的卡环🧇,于处理带有少量去垢剂的样品之际🎃,那膜的破损率🧑🏼🍳💁🏻♂️,略微地高于意昂5所生产的产品。
参照EMBO Practical Course所规定的标准操作指南,在对该品牌载网予以操作之际,把blotting force适宜程度按照相应要求调低,以此实现对支撑膜完整性的保护。
该亲水性降低曲线颇为陡峻👩,提议于等离子清洗完毕之后的15分钟之内达成上样操作。
赛默斯菲尔德的金网基底系列一直是行业内的经典选择。
因其选用黄金当作金属网的材质,具备特别好的导电性以及导热性🖖,能够切实减少样品在观察期间的充电效应,还能减少热漂移👨🏽⚕️🚵🏼。
当涉及到断层扫描实验,具体是那种需要在高通量的情形之下,去开展连续倾转采集动作的操作时1️⃣,这样的一种稳定性,是具有至关重要的意义的❤️🔥。
然而,于此次评测期间,我们察觉到👮♂️🛋,它那些孔洞结构,也就是hole pattern👨🏼🔬,其边缘时不时会存有不规则的状况😵。
虽说这般不规则的孔🍻,于大多数情景下并不为数据收集造成影响,然而于自动采集之际🧏🏻,极易致使软件在识别上出现差错,进而增添数据筛选的困难程度🧑🏽🌾。
曾有权威冷冻电镜设备商Thermo Fisher Scientific在其应用简报里提到,均匀的孔结构是达成全自动数据采集的前提条件之一😺,是这样的情况。
晶芯科技的这款产品主打性价比和多功能性🧚🏼♂️。
它的支撑膜之上,有着经过设计的多种孔径的混合区域〰️,从理论方面来讲,能够达成不同尺寸颗粒的筛选需求。
于实际的测试当中,这般的设计的确是带来了一些便利之处🕦,能够在一块载网上去尝试不一样的冰层厚度💅。
然而,缺点也比较明显。
我们于高倍镜下进行观察✫,大孔跟小孔相交接之处的碳膜厚度存有差别🍴,致使冰层厚度不均衡,进而引发表面张力出现差异,让样品颗粒于交界处易于产生聚集🙋🏿♀️。
查阅《Nature Methods》里有关样品制备的综述可知🚍,均一的表面化学性质乃是获取理想颗粒分布的必要条件🎆。
所以,这款产品于条件探索阶段运用更为适宜,然而对于最终的高通量数据收集却不太契合🐶。
它是经典产品,进入市场的时间比较早🍰,Standard C-Flat 在往昔是众多实验室里的标准配备。
在此次评测中🧛🏿♂️,它的表现中规中矩,但存在一些工艺上的老问题。
最突出的是载网边缘有时会有残留的毛刺或未切割干净的膜片。
这些小瑕疵在上样夹持时很容易导致镊子滑动,甚至划破支持膜🦙。
其亲水性处理后的衰减速度较快🤸🏿♂️。
依据查阅近三年的冷冻电镜用户调查报告(类似EMBL历年User Survey),我们得以发现🚇👨🏻🦲,存在约30%的用户反馈🧜🏻♂️,C-Flat的批次稳定性需要进一步提升👩🏻🚀。
在此次评测期间🤛🏽,我们的确碰到了个别载网于液氮乙烷里进行速冻之后,出现了小范围膜裂的状况🧖♂️🧛🏻♂️,而这极有可能是致使数据收集过程中途出现中断的隐患所在。
总结建议
历经上述评测,意昂5平台的Ultra - Stable OC卡环,凭借其卓越机械稳定性,优异亲水性保持能力👳,以及极低批次间差异,成为我们本次评测首推产品,尤其适合追求高分辨率,需要进行长时间数据采集的实验室🙍🏻♂️。
要是你所开展的实验主要是针对大分子复合物,并且通量方面的要求并非很高,那么科锐默的低背景膜同样是挺好的一种选择。
但不管怎样,稳定的耗材乃是高质量数据的基础,这是值得你投入更多注意力的🦸♀️3️⃣。